動(dòng)物細胞實(shí)驗室的實(shí)驗對象是離體的組織和細胞，對致病微生物及病毒無(wú)抵抗力，有被污染的危險，因此，細胞實(shí)驗室不同于其他實(shí)驗室之處就是要保持無(wú)菌。

一般來(lái)說(shuō)，無(wú)菌條件并不是要花很多錢(qián)去創(chuàng )造一個(gè)很大的無(wú)菌區域，重要的是動(dòng)物細胞實(shí)驗室建設上能夠防塵和不設立通道。使用超凈工作臺是創(chuàng )造無(wú)菌條件的簡(jiǎn)便方法，能為局部提供無(wú)菌條件，很大程度上方便了組織細胞培養工作，并使一些常規實(shí)驗室有可能用于進(jìn)行細胞培養。

動(dòng)物細胞培養實(shí)驗室應具備進(jìn)行無(wú)菌操作、培養、準備、清洗、消毒滅菌和儲存等六方面的功能。各個(gè)操作區域最好分別設置于相連的各個(gè)房間，特別是無(wú)菌操作室最好能單獨設置；如果各部門(mén)都安置在一個(gè)大實(shí)驗室內，無(wú)菌操作區與清洗、消毒滅菌區應分別位于兩端，而準備、儲存和培養區位于此兩區之間。

動(dòng)物細胞培養室的各種工作區域具有不同的特性和用途，在進(jìn)行相應的操作時(shí)，要嚴格遵守各區域的操作要求和規章制度。沃柏斯主要介紹動(dòng)物細胞培養室的規劃和布局設置、各操作區域的功能、基本設施、設置要求、操作要求和注意事項。

一、動(dòng)物細胞實(shí)驗室的設計規劃

動(dòng)物細胞培養是一種無(wú)菌技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響，動(dòng)物細胞培養室要求環(huán)境清潔，空氣清新、干燥、無(wú)塵。

動(dòng)物細胞培養實(shí)驗室由準備區、清洗區、消毒滅菌區、無(wú)菌操作區、培養區和儲存區6部分組成，這些區域的共同特點(diǎn)是房間要寬敞、明亮，地面要便于清潔、防滑，墻壁的質(zhì)地光滑堅硬，儀器設備布局合理，方便操作，避免交叉干擾，陳設簡(jiǎn)潔，便于清掃。

1、潔凈度和粉塵

潔凈度是指潔凈空氣中空氣含塵(包括微生物)量多少的程度。粉塵是指懸浮在空氣中的固體微粒，習慣上稱(chēng)塵、灰塵、塵埃、煙塵、粉末等。國際標準化組織規定，粒徑小于75μm的固體懸浮物定義為粉塵。

空氣潔凈度等級是潔凈空間單位體積空氣中，以大于或等于被考慮粒徑的粒子最大濃度限值進(jìn)行劃分的等級標準，國家藥品監督管理局發(fā)布的“中國標準”明確規定了潔凈度的4個(gè)等級。

潔凈度等級應在空態(tài)、靜態(tài)和動(dòng)態(tài)方法進(jìn)行測試，使用塵埃粒子測試儀來(lái)測定。

無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。細胞培養對無(wú)菌環(huán)境要求很高，在細胞操作時(shí)，一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導致細胞中毒死亡。

2、溫度和濕度

體外培養的細胞和體內細胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，一般最適宜生長(cháng)溫度為37°C， 溫度變化不應超過(guò)土0. 5°C，這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需的最適溫度決定的。溫度過(guò)低時(shí)細胞生長(cháng)緩慢甚至不生長(cháng)，溫度過(guò)高導致細胞死亡，溫度升高2°C時(shí)，則不利于細胞生存，溫度達到40°C以.上細胞將很快死亡。

濕度是表示大氣干燥程度的物理量?？諝獾母蓾癯潭确Q(chēng)為‘濕度”。在一定溫度下，一定體積的空氣中含有的水氣越少，則空氣越干燥;水氣越多，則空氣越潮濕。

在此意義下，常用絕對濕度、相對濕度、比較濕度、混合比、飽和差以及露點(diǎn)等物理量來(lái)表示;若表示在濕蒸氣中水蒸汽的質(zhì)量占蒸氣總質(zhì)量(體積)的百分比，則稱(chēng)之為蒸氣的濕度。濕度不夠或過(guò)高都不利于細胞生長(cháng)。

二、動(dòng)物細胞實(shí)驗室的功能分區

動(dòng)物細胞培養實(shí)驗室應具備進(jìn)行無(wú)菌操作、培養、準備、清洗、消毒滅菌和儲存6個(gè)方面的功能。動(dòng)物細胞培養實(shí)驗室的6個(gè)區域最好都單獨設置，分別置于相連的各個(gè)房間，特別是無(wú)菌操作室最好能單獨設置;如果沒(méi)有條件，可以將這些區域都安置在一個(gè)大實(shí)驗室內，設計原則一般是無(wú)菌操作區與清洗、消毒滅菌區分別位于兩端，無(wú)菌操作區設在室內較少走動(dòng)的內側，而準備、儲存和培養區位于此兩區之間，儀器設備安裝排列合理，便于清潔。

1、無(wú)菌操作區

無(wú)菌操作區是只限于細胞培養及其他無(wú)菌操作的區域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，較易造成污染。因此，接種工作要在空氣經(jīng)過(guò)滅菌的環(huán)境里進(jìn)行，小規模的無(wú)菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng )造，大規模的需建無(wú)菌室。

無(wú)菌室主要用于實(shí)驗材料的接種操作，所以也稱(chēng)接種室。

理想的無(wú)菌室應有內、外兩間，內間是無(wú)菌操作間，外間是緩沖間。房間容積不宜過(guò)大，以便于空氣滅菌。緩沖間用于準備工作，還有防止污染的作用，以保證操作間的無(wú)菌環(huán)境，同時(shí)可放置恒溫培養箱以及必需的小型儀器。

無(wú)菌操作間則專(zhuān)用于無(wú)菌操作、細胞培養，其大小要適當，且其頂部不宜過(guò)高以保證紫外線(xiàn)的滅菌效果;內壁應當用塑鋼板或瓷磚裝修，墻壁光滑無(wú)死角以便清洗和消毒。

無(wú)菌操作間容積小且為密閉式，一般無(wú)菌操作間的空氣消毒用紫外線(xiàn)燈，有的實(shí)驗室使用無(wú)臭氧紫外線(xiàn)消毒器或電子消毒滅菌器。無(wú)菌室內間當設拉門(mén)，以減少空氣的波動(dòng)，拉門(mén)應設在離工作臺最遠的位置上;外間的門(mén)最好也用拉門(mén)，且應與內間的門(mén)錯開(kāi)，要設在距內間最遠的位置上，兩個(gè)門(mén)也不要同時(shí)開(kāi)啟，以保證無(wú)菌室不因開(kāi)門(mén)和人的進(jìn)出帶進(jìn)雜菌;

緩沖間內應該設有水槽、鞋帽架、柜子和紫外燈，備有消毒服裝、鞋、帽、口罩、盆、手持噴霧器等。內間應配有工作臺、紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等，工作人員進(jìn)入操作間要穿上消過(guò)毒的工作服和拖鞋。

在條件比較簡(jiǎn)單的實(shí)驗室，要進(jìn)行組織細胞培養實(shí)驗，可以采用自制的單人或雙人無(wú)菌操作箱。箱內可安裝紫外線(xiàn)燈供消毒滅菌和日光燈供照明,操作時(shí)僅雙手伸入箱內，也可達到一定的無(wú)菌條件。由于箱內空氣不流動(dòng)，溫度較高，因此操作時(shí)間不宜太長(cháng)，僅可做一般的細胞培養工作。無(wú)菌操作區的常用的設備和用具有1-2臺 超凈工作臺，配有酒精燈、鑷子、剪刀、不銹鋼的器具、75%的酒精棉球、特種蠟筆、鉛筆、記錄本、標簽紙、廢物筐等。

無(wú)菌室容積小而嚴密，使用一段時(shí)間后，室內溫度很高，故應設置通氣窗。

2、培養區

培養區為組織細胞提供適宜溫度進(jìn)行培養:培養區對無(wú)菌的要求不像無(wú)菌區那樣嚴格，但仍需清潔、無(wú)塵，因此也應設在干擾少而非來(lái)往穿行的區域。小規模的培養在恒溫培養箱中進(jìn)行，大規模的培養需在可控制溫度的培養室中進(jìn)行。

為了控制培養溫度，培養室最好設在陽(yáng)光不能直接照射的地方，一般用拉門(mén)，以防止空氣流動(dòng)，并留一個(gè)通氣窗，安上排氣扇，室內溫度由空調控制。天花板和內墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設，要光滑無(wú)死角，以便于清潔和消毒，也不易在墻角堆積灰塵。培養室外應有預備間或走廊。

建培養室成本費用較高，一般實(shí)驗室多采用恒溫培養箱進(jìn)行培養；培養區應配有搖床、生化培養箱、CO2培養箱等。

3、儲存區

儲存區用于存放無(wú)菌培養液、試劑、培養瓶和樣品，要求取放物品方便，環(huán)境也需要清潔、無(wú)塵。為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196C。

4、準備區

準備區用于配制培養液和有關(guān)培養用的液體等。應設有試劑柜、器械柜、實(shí)驗臺和上水道、電源等，配備的主要儀器設備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養分裝器、各種規格的培養瓶、培養皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。

在有天平、pH計、磁力拌器等設備下完成制備以后，應在無(wú)菌操作臺進(jìn)行過(guò)濾除菌。液體制備直接關(guān)系組織細胞養的成敗，因此必須嚴格無(wú)菌操作。

5、清洗區

清洗區用于洗刷所有細胞培養器皿等，在實(shí)驗室的一側應設置專(zhuān)用的洗滌水池，用來(lái)洗玻璃器皿，備有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等，中央實(shí)驗臺還應配置小水槽，用來(lái)清小型玻璃器皿。

清洗區應配有柜子、加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，有條件可配置玻器皿清洗機，此外還應配置落水架、干燥箱、超聲波清洗器等。清洗區地面應耐濕，設置地并排水良好

6、消毒滅菌區

直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。消毒滅菌區主要用于培養液的滅和各種器具的消毒滅菌，應備有高壓蒸汽滅菌鍋、細菌過(guò)濾設備、電熱干燥箱、

消毒柜、排風(fēng)火設備等。清洗和消毒滅菌區應與其他區分開(kāi)。

三、動(dòng)物細胞實(shí)驗室的規章制度

①每次實(shí)驗前必須充分預習，熟悉實(shí)驗操作中主要步驟和環(huán)節，了解儀器的性能和操方法。

②嚴禁將與實(shí)驗無(wú)關(guān)的物品帶人實(shí)驗室。

③除嚴格按規程進(jìn)行無(wú)菌操作，要培養良好習慣以防染菌或污染環(huán)境，并做好必要的全防護。

實(shí)驗前清洗雙手，用75%酒精棉球擦手，用濕布擦凈臺面，必要時(shí)可用新潔爾滅(扎溴銨)溶液;進(jìn)行接種操作時(shí)，要關(guān)閉門(mén)窗，以防空氣對流，保持安靜和良好秩序，盡量減少走動(dòng)和說(shuō)話(huà)，以防塵埃飛揚和唾沫飛濺；實(shí)驗室內嚴禁吸煙和飲食;凡需進(jìn)行培養的材料，應注明名稱(chēng)、接種日期及操作者姓名(或組別)，放在指定的培養箱中進(jìn)行培養;帶菌移液管、培養瓶、培養皿等器材，應置于專(zhuān)用盤(pán)、架，確定不再使用后，應立即投入消毒液中浸泡20min以上，或煮沸0.5h或進(jìn)行蒸汽滅菌后再清洗；離開(kāi)實(shí)驗室前要用肥皂洗手;實(shí)驗室中物品未經(jīng)許可，不得攜帶出實(shí)驗室。

④愛(ài)護儀器、設備，認真按操作規程使用儀器、設備,并作好使用記錄。

⑤認真做好細胞培養實(shí)驗記錄，以了解細胞生長(cháng)情況，清晰填寫(xiě)實(shí)驗報告

⑥發(fā)行意外情況時(shí)，應立即報告，在相關(guān)管理人員指導下及時(shí)處理。

⑦節約水、電、試劑，適量取用實(shí)驗藥品等耗材。

⑧實(shí)驗完畢清除雜物，認真清洗器皿、清理試劑、清潔臺面、保養儀器，物品歸類(lèi)還原。

⑨值日生負責打掃實(shí)驗室衛生，關(guān)好水、電、門(mén)、窗，經(jīng)相關(guān)管理人員檢查實(shí)驗室安全，方可離開(kāi)實(shí)驗室。